白芷是一味重要的傳統中藥,為傘形科植物白 芷 Angelica dahurica ( Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. F 或 杭 白 芷 A. dahurica ( Fisch. ex Hoffm.) Benth. et Hook. F. var. formosana ( Boiss.) Shan et Yuan 的干燥根,始載于《神農本草經》。臨床應 用廣泛,具有解表散寒、祛風止痛、消腫排膿之功效, 用于治療風寒感冒、鼻淵頭痛、風濕痹痛等癥。
超高效液相色譜系統( Waters Acquity UPLC HClass System,配 備 有 Acquity UPLC QSM、Acquity UPLC Sample、Manager FTN、Acquity UPLC PDA Detector 以及 Empower2 工作站) ; KQ-300DE 超聲波清 洗器,昆山市超聲儀器有限公司; CPA225D 電子天 平,北京賽多利斯科學儀器有限公司; FA2004B 電 子天平,上海佑科儀器儀表有限公司; Legend Micro 17R 微量離心機,Thermo Scientific; VORTEX-5 渦旋 儀,其林貝爾儀器制造有限公司; YKF-150 EDI 超純 水設備,杭州華新凈水有限公司。
歐前胡素( HI041232198 ) 、異歐前胡素 ( HI041233198) 、水和氧化前胡素( HA061413198) 、 佛手柑內酯 ( HB204394198 ) 、 白當歸素( HB157470198) 、花椒毒酚( HX106886198) 、氧化前 胡素( HA062924198) 、花椒毒素( HA061509198) 、補 骨脂素( HP018120198) ,均購自寶雞辰光生物科技 有限公司,純度> 98%。實驗用甲醇、乙腈均為色譜 純( 美國 Fisher 公司) ,其余為分析純; 水為屈臣氏 純凈水。10 批不同產地的白芷藥材信息見表 1,經 陜西中醫藥大學陜西省中藥資源產業化協同創新中 心劉世 軍 副 教 授 鑒 定,為 白 芷 A. dahurica 的 干 燥根。
采用 ACQUITY UPLC BEH C18( 2. 1 mm×50 mm, 1. 7 μm) 色譜柱; 流動相為水( A) -乙腈( B) ; 梯度洗 脫,洗脫程序為: 0 ~ 5 min,10% ~ 25% B; 5 ~ 18 min, 25% ~ 60% B; 18 ~ 22 min,60% ~ 90% B; 22 ~ 25 min,90% ~10% B; 25~30 min,10% B; 流速為0. 2 mL·min-1 ; 進樣量為2 μL; 柱溫25 ℃; 檢測波長設定為254 nm。9 個指標性成分的理論塔板數均不低于16 000,此色譜條 件檢測時間短,信息量豐富,可用于指紋圖譜及活性成 分含量測定分析。
精密稱取花椒毒酚、水合氧化前胡素、白當歸 素、補骨脂素、花椒毒素、佛手柑內酯、氧化前胡素、 歐前胡素和異歐前胡素對照品適量,分別加甲醇制備成質量濃度為 1 g·L-1 的單一對照品溶液; 精密吸取上述儲備液適量,混合后加甲醇稀釋,使最終制成 質量濃度分別為 50,250,50,25,25,50,500,500, 500 mg·L-1 的混合對照品溶液。
精密吸取 2. 2 項下混合對 照品溶液,用乙腈逐級稀釋,搖勻。分別按 2. 1 項下 色譜條件進樣分析,進樣量為 2 μL,測定峰面積。 以峰面積為縱坐標( Y) ,質量濃度為橫坐標( X) ,繪 制各標準曲線,得到花椒毒酚、水合氧化前胡素、白 當歸素、補骨脂素、花椒毒素、佛手柑內酯、氧化前胡素、歐前胡素和異歐前胡素的線性回歸方程和線性 范圍,9 個呋喃香豆素成分在各濃度范 圍內的線性關系良好。取混合對照品溶液,按 2. 1 項 下色譜條件連續進樣 6 次,記錄 10 個呋喃香豆素成 分的峰面積,計算 RSD,各呋喃香豆素成分峰面積 的 RSD 在 1. 6% ~ 2. 9%,表明儀器精密度良好。 按 2. 3 項下方法制備供試品 溶液,室溫下放置,按 2. 1 項下色譜條件分別在 0, 2,4,8,12,24,48 h 時進樣分析,測定各呋喃香豆素 成分的峰面積,計算 RSD,各呋喃香豆素成分峰面 積的 RSD 在 2. 3% ~ 3. 0%,說明樣品在 48 h 內穩定 性良好。按 2. 3 項下方法平行制備 6 份的供試品溶液,2. 1 項下色譜條件進樣分析,計算 10 個呋喃香豆素成分質量分數的 RSD,RSD 在 1. 2% ~ 3. 1%,說明方法的重復性良好。 精密稱取已測定的供試 品樣品 9 份,每份為 1 g,分別加入低、中、高 3 個濃 度的對照品混合液,每個濃度 3 份,按 2. 3 項下方法 平行制備供試品溶液,2. 1 項下色譜條件測定 10 個 呋喃香豆素的峰面積,并計算計算加樣回收率和 RSD。各呋喃香豆素成分的平均加樣回收率在 91. 80% ~ 101. 6%; RSD 小于 2. 6%。
本實驗分別對提取溶劑、藥材-溶液比以及超聲 提取時間等條件進行了系統考察,以提取方法穩定 可行,提取效率最優,色譜峰響應、分離度良好為指 標,最終選擇的提取溶劑為純甲醇、藥材-溶液比為 1 ∶20、超聲提取時間為 1. 5 h。用 PDA 檢測器對樣 品進行 190 ~ 400 nm 全波長掃描,比較各波長下色 譜圖,各呋喃香豆素成分均在 254 nm 有較大吸收, 因此選定 254 nm 為含量測定波長。
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