脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種 成分，細菌裂解后進入宿主體內，能引起內毒素血 癥，刺激機體炎癥因子的產生增加，產生局部或系 統性炎癥反應。大鼠腸隱窩上皮細胞（intestial epithelial cell line，IEC-6），為腸黏膜屏障的組成部 分，LPS 可誘導 IEC-6 細胞發生炎癥反應，炎癥介 質引起緊密連接（TJ）復合物結構、細胞骨架和細胞通 透性的改變，這種炎癥反應的發生將損害腸黏膜的 屏障功能 。

1 材料與方法

1.1 動物

SD 大鼠（230~270 g），SPF 級，雄性，購 于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號： SCXK（湘）2016-0002。

1.2 細胞株

IEC-6 細胞，購于中國醫學科學研究院 基礎醫學研究所基礎醫學細胞中心。

1.3 藥物及試劑

參苓白術散，北京漢典制藥有限公 司，批號：Z20040146；脂多糖（LPS），美國 Sigma 公司產品，批號：025M4040V；TRIzol Reagent，北 京全式金公司，批號：K10526；MTT 細胞增殖試劑 盒，南京凱基生物有限公司，批號：20161229；IL8 ELISA 試劑盒，欣博盛生物科技有限公司，批號： ERC008；mcherry-GFP-LC3 雙標腺病毒，漢恒生物 科技（上海）有限公司，批號：AP07071804；兩步 RT-PCR 試劑盒（批號：AE301）、100bp Plus DNA Ladder（批號：K20415），北京全式金公司；瓊脂糖 （Agarose）， Genview 公 司 ， 批 號 ： 2B180205600； GoldView I 型核酸染料（批號：41230）、50×TAE 電泳液（批號：20141021），北京索萊寶公司； GAPDH、 ATG5、 ATG12、 ATG13、 ATG1611、 ATG1612 引 物，生工生物工程（上海）有限公司。

1.4 儀器

I 類 B 型醫用超凈工作臺，上海博訊實業有限公司醫療設備廠；MCO175 型細胞培養箱，日本 SANYO 公司；S40-SLIDER 倒置普通光學顯微鏡、 DMI3000B 型熒光倒置顯微鏡，德國 Leica 公司； Elx800 型酶標儀，美國 BioTek 公司；PCR 儀，德國 Eppendorf 公司。

2 結果

當 LPS 濃度達到 100 μg · mL-1 時，細胞活力值 與空白組比較開始出現明顯差異（P < 0.05），該濃度 下細胞抑制率為 29.3 %，因此選用 100 μg · mL-1 的 LPS 濃度為后期 IEC-6 細胞炎癥模型的造模濃度。與對照組比較，不 同濃度含量的參苓白術散含藥血清對 IEC-6 細胞活 力均無明顯作用（P > 0.05）。mRFP -GFP -LC3 腺病毒滴 度為 1010 pf μ·mL-1 。從圖 4 可以看出，加入濃度梯 度為每孔 0.1、0.2、0.4、0.8 μL 的 mcherry- GFPLC3 腺病毒轉染 IEC-6 細胞，腺病毒轉染率和熒光 強度隨腺病毒濃度的加大而增強。每孔加入 0.4 μL 腺病毒時 IEC-6 細胞轉染率高，熒光強度最強，且 顯微鏡下觀察細胞形態較 0.8 μL 腺病毒組正常，故 選取每孔加入 0.4 μL mRFP-GFP-LC3 腺病毒量作為 感染 IEC-6 細胞正式實驗的濃度。與空白組比 較，模型組中自噬體斑點形成明顯減少或消失（P < 0.05）；與模型組比較，參苓白術散含藥血清組、自 噬誘導劑 Rapamycin 組的自噬斑點形成明顯增加，自 噬活力增強（P < 0.05）；自噬抑制劑 3-MA 組與模型 組比沒有差別，自噬斑點稀少（P < 0.05）。結果表明 參苓白術散能促進損傷的 IEC-6 細胞發生自噬。

3 討論

自噬是廣泛存在于真核細胞內的一種以細胞質空泡自噬化為特征的溶酶體依賴性降解途徑，實現細 胞本身代謝需要和某些細胞器更新，主要與細胞的 存活、分化、發育和內環境穩態的維持密切相關， 在維持腸黏膜免疫系統穩態中發揮重要作用，細胞 自噬同樣發揮著重要作用。近期研究也證實在腸上 皮細胞中，自噬基因 ATG16L1 可負性調控 IL-1β 誘 導的炎癥因子表達 ，任彩瑗等發現細胞自噬可通 過調控 NF-κB 分子信號通路抑制 LPS 誘導的炎癥反應。