腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)常見的發(fā)生于神經(jīng)外胚層的 惡性腫瘤，臨床上常采用手術(shù)治療，并結(jié)合放療 和化療等手段。由于顱內(nèi)禁區(qū)多，手術(shù)難度大且 不能徹底，加之腦膠質(zhì)瘤的浸潤性生長，預(yù)后差， 因此化療在腫瘤的治療過程中顯得日益重要。然 而目前臨床上常用的抗腫瘤藥物難以在腦膠質(zhì)瘤 部位形成高濃度，治療效果不理想。因此構(gòu)建針 對腦膠質(zhì)瘤的靶向遞藥系統(tǒng)顯得十分必要。

1 材料與儀器 

1.1 材料 

聚酰胺-胺(PAMAM G5.0，Mw=28 824.81，美 國 Sigma 公司，批號：MKBS5794)；BO(江西聚鵬 天然香料油有限公司，批號：130910；純度>97%)； FA、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 [1-(3dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride，EDC·HCl]、N-羥基琥珀酰亞胺 (N-Hydroxysuccinimide，NHS)、丁二酸酐(succinic anhydride，SA)(上海阿拉丁公司，批號分別為 C1405036，K2425066，C1405036；純度>98%)； 鹽酸阿霉素(DOX·HCl，浙江海正制藥有限公司， 批號：121210；純度>98%)；DOX·HCl 對照品 (DOX ，中國食品藥品檢定研究院，批號： 130509-200306；純度>98%)；柔紅霉素(DNR，內(nèi) 標(biāo)，大連美侖生物技術(shù)有限公司，批號：20120813； 純度>98%)；肝素鈉(常州千紅生物制藥股份有限 公司，批號：120308)；水合氯醛(天津永大化學(xué)試 劑有限公司，批號：20120521)；生理鹽水(河北天 成藥業(yè)股份有限公司，批號：A12062504)；甲醇、 乙腈(美國 Honeywell Burdick & Jackson 公司，色 譜純，批號分別為 130296，13620741)；磷酸(色譜 純，美國 TEDIA 公司，批號：504506)；其他試劑 均為分析純。 

1.2 儀器 

Agilent 1200 高效液相色譜儀(美國 Agilent 公 司)；Mill-Q 超純水儀(美國 Millpore 公司)；pH 酸 度計(瑞士 Mettler-Toledo 公司)；Thermo Forma 超 低溫冰箱(美國 Thermo Fisher Scientific 公司)； CP225D 電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公 司)；TGL-16B 高速臺式離心機(上海安亭科學(xué)儀器 廠)；VORTEX-5 型渦旋混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)；2XZ-2 型真空干燥箱、氮氣吹 掃儀(臨海市譚式真空設(shè)備有限公司)；高速組織勻 漿機(上海凈信科技有限公司)；KQ5200DE 型數(shù)控 超聲波清洗器(上海超聲儀器有限公司)。 

1.3 細胞和實驗動物 

大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細胞由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供。動物種屬及來源：Wistar 大鼠 12 只，♂，清 潔級，體質(zhì)量(220±10)g，購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)動 物中心，合格證號：SCXK(滬)2013-0016。

2 方法 

2.1 FA-BO-PAMAM 的合成 

稱取 SA 2.0 g 溶于 50 mL 無水二氯甲烷中， 加入等摩爾的二甲氨基吡啶(DMAP)和三乙胺 (TEA)，同時稱取 500 mg BO 加入到上述溶液中， 室溫下油浴反應(yīng) 48 h，得產(chǎn)物 BO-SA。取 BO-SA 30 mg 溶于 DMF 后，與 5 倍當(dāng)量的 EDC 和 NHS 的 PBS(pH=5.7)溶液混合，室溫下活化反應(yīng) 2 h 后， 正己烷萃取得 BO-SA 活性酯。取以上活性酯加入 到 PAMAM(64∶1)的水溶液中，室溫過夜反應(yīng)后 轉(zhuǎn)移到透析袋中(Mr=3 500)，用超純水透析 24 h， 凍干得到白色固體產(chǎn)物 BO-PAMAM。 FA 分子與 PAMAM 的合成依照所述。 稱取 FA 2 mg 溶于 4 mL DMF 和 DMSO 的混合溶 液中(3∶1)，然后加入 5 倍當(dāng)量的 EDC，室溫下活 化反應(yīng) 3 h 。將活化的反應(yīng)液逐滴加入到 BO-PAMAM 的水溶液中，反應(yīng) 24 h 后，用大量 的水透析 24 h，將透析液凍干得到黃色的固體產(chǎn) 物 FA-BO-PAMAM。 

2.2 FA-BO-PAMAM/DOX 的制備 

準(zhǔn)確稱取 DOX·HCl 1 mg(記為 W0)，溶解于 2 mL DMSO 和 3 倍當(dāng)量的 TEA 的混合溶劑中， 室溫攪拌過夜后逐滴加入到各載體的 DMSO 溶液 中，避光反應(yīng) 24 h。反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)液中加 入超純水，再用乙酸乙酯萃取除去游離的 DOX， 冷凍干燥后得到深紅色的凍干品，稱重(記為 W)。 UV 測定載藥復(fù)合物在 501 nm 處的吸光度，計算 出載體中所含的藥量(記為 W1)，從而計算載藥量 和包封率。

2.3 體內(nèi)樣品色譜條件 

色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB C18柱(250 mm× 4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-0.01 mol?L?1 磷酸 二氫鈉 ( 磷酸調(diào) pH 至 3.0)(29∶71) ；流速： 1.0 mL?min?1 ；柱溫：25 ℃；檢測波長：激發(fā)波長 498 nm，發(fā)射波長 556 nm；進樣量：20 μL。

3 結(jié)果 

3.1 載藥量和包封率的測定 

利用 UV 測定的 BO-PAMAM/DOX 和 FA-BOPAMAM/DOX 的載藥量分別為 (6.69±0.35)%和 (6.64±0.09)% ，包封率分別為 (68.40±5.31)% 和 (64.58±0.85)%(n=3)。 

3.2 方法的專屬性 

將空白血漿和組織的色譜圖與加入 DOX 和 DNR 的色譜圖，以及給藥后得到的血漿和組織的 色譜圖進行比較。DOX 與 DNR 的峰 形較好，分離度>1.5，且空白血漿和組織對測定無 干擾。

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